目的:构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索SET序列,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导入L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞.结论:利用慢病毒介导的RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞.
作者:刘建军;蒋英芝;叶金波;李杰;杨细飞;周丽;黄海燕;黄新凤
来源:癌变·畸变·突变 2013 年 25卷 1期