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目的:分析十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中非样品条带的来源,并探讨其消除及控制方法。方法:在每个凝胶梳孔只加全成分上样缓冲液或缺少某些成分的试液,不加蛋白样品直接电泳,观察非样本条带出现情况,再分别对上样缓冲液中还原剂、甘油成分设置成不同浓度梯度进行电泳分析,观察条带表现。另外观察不同的上样梳预处理对条带表现的影响,明确非样品条带来源,找到去除方法。最后,进一步通过副溶血弧菌蛋白电泳结果验证非样品条带控制方法的有效性。结果:在未对上样梳进行特别处理的情况下,上样试液(全成分缓冲液或缺少某些成分的试液)中只要有还原剂和甘油就会出现非样品条带,但条带强弱与还原剂浓度、甘油含量无明显剂量关系。用8 mol/L尿素处理上样梳可使非样品条带明显减弱甚至消失。结论:非样品条带源于上样梳蛋白质污染,用尿素等离液剂或强力去污剂处理上样梳可有效减少或消除非样品条带,以消除非样品条带对检验结果的影响。

作者:周海涛;曾华书;马伟钦;侯红斌;陈润莉;张勇;李康

来源:癌变·畸变·突变 2013 年 3期

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作者:
周海涛;曾华书;马伟钦;侯红斌;陈润莉;张勇;李康
来源:
癌变·畸变·突变 2013 年 3期
标签:
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 非样品条带 上样缓冲液 污染 SDS-PAGE non-sample bands sample loading buffer pollution
目的:分析十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中非样品条带的来源,并探讨其消除及控制方法。方法:在每个凝胶梳孔只加全成分上样缓冲液或缺少某些成分的试液,不加蛋白样品直接电泳,观察非样本条带出现情况,再分别对上样缓冲液中还原剂、甘油成分设置成不同浓度梯度进行电泳分析,观察条带表现。另外观察不同的上样梳预处理对条带表现的影响,明确非样品条带来源,找到去除方法。最后,进一步通过副溶血弧菌蛋白电泳结果验证非样品条带控制方法的有效性。结果:在未对上样梳进行特别处理的情况下,上样试液(全成分缓冲液或缺少某些成分的试液)中只要有还原剂和甘油就会出现非样品条带,但条带强弱与还原剂浓度、甘油含量无明显剂量关系。用8 mol/L尿素处理上样梳可使非样品条带明显减弱甚至消失。结论:非样品条带源于上样梳蛋白质污染,用尿素等离液剂或强力去污剂处理上样梳可有效减少或消除非样品条带,以消除非样品条带对检验结果的影响。