目的 构建及鉴定携带小鼠PTG基因(NM_016854)的过表达重组腺病毒载体,为深入研究PTG的功能奠定基础.方法 化学合成小鼠PTG基因的编码序列,经聚合酶链式反应(PCR)扩增、酶切,后插入GV314载体(CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP),得到重组穿梭质粒pGV314-PTG;进一步BamHⅠ/AgeⅠ双酶切,产物交换入线性化表达载体pDC315,构建重组腺病毒Ad-PTG,将其转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,进行纯化及滴度检测,最后利用PCR、Western blot及测序验证重组腺病毒.结果 经PCR、Western blot及测序后,结果显示成功构建pGV314-CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-PTG过表达腺病毒载体(Ad-PTG),终点稀释法测得病毒滴度为4×1010 PFU/ml,Western blot和荧光定量PCR显示PTG的蛋白和mRNA表达水平显著升高.结论 成功构建携带小鼠PTG基因的重组过表达腺病毒载体,且能有效上调肝细胞中PTG基因的表达.
作者：王晨玺；邓霞；赵志聪；蔡珍生；张盼盼；李莲；李昊翔；赵丽；王东；杨玲；袁国跃
来源：安徽医科大学学报 2022 年 57卷 4期
