目的 采用流式细胞仪优化Hoechst33342染料浓度,检测肝细胞癌(HCC) MHCC-97H细胞中侧群(SP)细胞与非侧群(NSP)细胞中微小RNA-21(miRNA-21)的表达情况.方法 常规制备MHCC-97H单细胞悬液,采用不同浓度(5、6、7、8、9、10、11、12 mg/L)的荧光染料Hoechst33342染色,以维拉帕米拮抗组为对照,优化最适合的Hoechst33342染料浓度,通过流式细胞仪分离SP、NSP细胞;采用RT-PCR法检测SP、NSP细胞中miRNA-21的表达情况.结果 优化Hoechst33342浓度为10 mg/L,活细胞比例较高,是最适染色的浓度,此时MHCC-97H中SP细胞比例为(8.4±0.7)％;从SP、NSP细胞中提取的总RNA纯度为1.8～2.0,其中没有DNA和蛋白质混杂;SP细胞的miRNA-21表达水平是NSP细胞的(7.30±0.78)倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 优化的Hoechst33342浓度可以提高SP细胞的纯度,同时miRNA-21表达可能与HCC干细胞分化有关.
作者：吕洋；杨珮珮；叶龙；赵平；姜经航
来源：癌症进展 2018 年 16卷 4期
