根据GenBank报道的犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)序列,设计两对联合PCR引物,其中一对为CAV-1和CAV-2通用引物,另一对为CPV引物.在建立单项PCR基础上,通过优化Mg2+离子浓度和循环参数等反应条件建立联合PCR,确定联合PCR条件为:96℃180s,96℃30s,56℃30s,72℃80s,30个循环.联合PCR结果显示:CAV-1扩增片段大小为497bp,CAV-2为1 019bp,CPV为719bp;细胞和其它相关病毒对照均无扩增带.上述PCR产物经用限制性内切酶酶切和克隆测序,结果均与相应病毒的应有条带和序列相同.敏感性比较试验结果表明,联合PCR比用细胞培养分离病毒敏感.将联合PCR应用于15份CAV和CPV细胞培养物,5份CAV-1、1份CAV-2和3份CPV人工感染犬病料以及30份临床病料检测,并与电镜负染、HA/HI及病毒分离等方法的结果进行比较,结果显示,联合PCR的检出率和病毒分离结果一致,高于电镜负染和HA/HI试验.以上结果说明:CAV-1/CAV-2和CPV联合PCR不仅具有很好的特异性和敏感性,而且可以在短时间内(2.5h～3h)同时鉴定出上述三种病毒,因此具有良好的实验室诊断和临床应用价值.
作者：王雷；夏咸柱；卫广森；扈荣良；刘维全；邹啸环；黄耕
来源：病毒学报 2003 年 19卷 3期
