目的:研究特异性沉默人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS2,亦称TMSGI的小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)对人前列腺癌细胞系低转移潜能亚系PC-3M-2B4的体外侵袭能力的影响及相关机制.方法:通过脂质体转染法将特异性沉默LASS2基因的siRNA转染入PC-3M-2B4细胞.分别用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenetic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western blot方法检测LASS2siRNA对PC-3M-2B4细胞LASS2基因和蛋白表达的抑制作用,筛选有效的siRNA片段；运用液泡型ATPases( vacuolar H+ -ATPases,V -ATPases)活性测定试剂盒来检测PC-3M-2B4细胞的V-ATPases活性；运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测PC-3M-2B4细胞外氢离子浓度；采用Westem blot方法分析PC-3M-2B4细胞的基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的表达及分泌情况；应用明胶酶谱法检测PC-3M-2B4细胞上清液中MMP-2的活性；利用细胞划痕修复实验和Transwell法检测细胞体外迁移及侵袭能力.结果:通过RFQ-PCR和Westem blot筛选后,siRNA-2能显著抑制PC-3M-2B4细胞LASS2基因mRNA和蛋白的表达,对mRNA表达的抑制率可达84.5％,对蛋白表达的抑制率可达60％.PC-3M-2B4细胞转染LASS2 siRNA-2后,其V-ATPases的活性

作者：徐晓艳；由江峰；裴斐；张波

来源：北京大学学报（医学版） 2011 年 43卷 6期