目的:寻找肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)对阿昔替尼耐药的潜在机制,以期拓展对阿昔替尼耐药的理解,便于设计更有针对性的治疗方案,提高患者的治疗效果及生存预后.方法:通过摸索阿昔替尼对ccRCC细胞系786-O与Caki-1的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),使用此浓度下的阿昔替尼体外反复刺激细胞30个周期,构建对阿昔替尼耐药的细胞系,未被阿昔替尼处理过的细胞系为敏感细胞系,检测耐药细胞系及敏感细胞系在细胞增殖、细胞凋亡水平上的表型差异.通过转录组测序,在两耐药细胞系共同上调表达的差异基因内筛选出可能参与耐药过程的基因,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantita-tive polymerase chain reaction,RT-qPCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)验证耐药细胞系中靶基因的表达量.在基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库中分析靶基因在ccRCC肿瘤及瘤旁组织的表达差异,在卡普兰-梅尔绘图(Kaplan-Meier Plotter,K-M Plotter)数据库中分析靶基因对ccRCC患者的预后影响.对耐药细胞系的靶基因使用慢病毒载体的核糖核酸干扰进行敲低后,再次检测细胞表型差异.使用WB检测不同处理细胞系的细胞凋亡相关蛋白
作者:刘耘充;吴宗龙;葛力源;杜坦;吴雅倩;宋一萌;刘承;马潞林
来源:北京大学学报(医学版) 2023 年 55卷 5期