目的 通过技术改良,进一步摸索适于膜片钳实验的成年大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞的急性分离方法.方法 应用显微外科技术获取成年大鼠DRG,采用改良的双酶顺序消化(先胶原酶,后胰蛋白酶)及双血清(胎牛血清+马血清)共同培养法,急性分离培养DRG.倒置显微镜下观察神经元的形态,选取已贴壁的细胞,用全细胞膜片钳技术记录其基本膜电生理特性.加入河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)后再次记录DRG神经元的钠离子电流变化.结果 本实验可获得形态良好、结构完整的单个DRG神经元,表面光亮,胞膜完整清晰,呈圆形或椭圆形.其静息膜电位为(55.22±4.39)mV,加入TTX后可记录到缓慢失活的河豚毒素不敏感(tetrodotoxin-resistant,TTX-r)的钠离子电流.其中,中等直径DRG神经元高阻封接成功率为73.2％,高于小直径和大直径DRG神经元的封接成功率(P＜0.05).结论 经改良的DRG急性分离方法分离效率高、可操作性强.分离得到的中等直径DRG神经元状态良好,更适合膜片钳实验.
作者：邱方；刘艳红；姜雨鸽；张树卓；刘晓燕；米卫东
来源：北京医学 2012 年 34卷 8期
