目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)体内诱导基因Rv0808,并制备多克隆抗体,研究其编码蛋白的抗原性,了解诊断应用价值.方法 高保真PCR扩增Rv0808基因,克隆入表达载体pET-30a(+)后转化大肠杆菌BL21 (DE3),测序正确的克隆用IPTG诱导表达.用镍柱纯化重组蛋白,然后用纯化蛋白免疫新西兰白兔,制备和纯化多克隆抗体.将重组蛋白分别与多克隆抗体和结核病患者血清进行Western blot鉴定,并尝试用多克隆抗体进行免疫组化染色检测巨噬细胞中M.tb.结果 成功构建了pET-30a(+):Rv0808重组表达载体.经过重组蛋白的可溶性表达及纯化后,SDS-PAGE结果显示在66 kD处有一单一蛋白条带.将此蛋白免疫新西兰白兔后获得了效价为6 400的多克隆抗体.重组蛋白与多克隆抗体可以发生免疫反应,但却不能检测出结核患者血清中的相应抗体.用此多克隆抗体也无法检测出巨噬细胞中的M.tb.结论 结核分枝杆菌Rv0808编码蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,但可能对于结核病的诊断价值较小.
作者：李自慧；杜博平；贾红彦；古淑香；邢爱英；周立娟；曹廷明；郑晓静；刘忠泉；杜凤娇；张宗德
来源：北京医学 2012 年 34卷 9期
