目的：构建人类磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican3, GPC3）重组原核表达载体。方法以人类肝脏cDNA文库为模板扩增出GPC3基因产物，与pMD-18 simple T 载体进行连接构建出T克隆载体；从T载体上获取基因片段，并对pET-32a（+）空载体进行双酶切，用T4连接酶连接，构建出pET-32a（+）-GPC3原核表达载体；对构建好的载体再次测序，并进行诱导表达。结果 PCR产物长度为837 bp，即扩增的GPC3 C末端长度，与NCBI网站的相比较，序列完全一致，说明pET-32a （+）载体中正确插入了目的片段，并且诱导表达出蛋白。结论成功构建了融合表达Pet-GPC3载体，蛋白诱导表达成功。
作者：刘秀红；李宁；武彦宁；赵焕英；李莉
来源：北京医学 2014 年 6期
