目的:观察体外转染配对盒基因2 (PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制.方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系.细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组.Western blotting法和实时荧光定量(Real-time) PCR法检测各组细胞WNT4和β-catenin表达.应用靶向WNT4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的WNT4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链.将最佳干扰链WNT4 siRNA转染至稳定转染PAX2细胞.在沉默24、48、72和96 h应用Western blotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点.应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达.结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组WNT4和β-eatenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P＜0.05).阴性siRNA转染入稳定转染PAX2细胞24 h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46％±4.48％.3条WNT4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western bl

作者：李里；南晓娟；吴玉斌

来源：吉林大学学报（医学版） 2013 年 39卷 4期