目的：构建成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）真核表达载体 MSCV／puro-fgfr3-WT和 MSCV／puro-fgfr3-DN，并检测 FGFR3蛋白在人白血病细胞系 K562中的表达。方法：通过 PCR 法获得 FGFR3全长基因（fgfr3-WT）和截短失活型的 FGFR3（fgfr3-DN），经双酶切后与真核表达载体 MSCV／puro 连接，构建 MSCV／puro-fgfr3-WT和 MSCV／puro-fgfr3-DN重组表达质粒。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后，脂质体介导转染至人白血病细胞系K562中，经 puromycin抗性筛选后，Western blotting法和流式细胞术检测细胞中 FGFR3蛋白的表达。结果：PCR 法鉴定 MSCV／puro-fgfr3-WT 和 MSCV／puro-fgfr3-DN 重组质粒，2个质粒分别扩增出2400 bp的 fgfr3-WT全长基因片段和1200 bp 的 fgfr3-DN 截短型片段，表明成功扩增 fgfr3-WT 全长基因和1200 bp的 fgfr3-DN基因；双酶切 MSCV／puro-fgfr3-WT重组质粒，获得2400 bp的目的基因片段；测序显示， fgfr3-WT片段大小为2400 bp，Blast对比分析表明测序结果与 GenBank中的 FGFR3序列完全一致。fgfr3-DN片段大小与预先设计的序列完全一致，表明成功构建野生型 FGFR3和突变失活型 FGFR3真核表达载体；Western blotting 检测，与对照组（K562-MSCV）比较，MSCV／puro-fgfr3-WT转染组（K56

作者：许会静；杜彤华；孙艳；李校堃；肖业臣

来源：吉林大学学报（医学版） 2014 年 3期