目的：构建重组慢病毒质粒 pSin-EF2-Puro-DAB2IP并转染前列腺癌PC3细胞，观察其转染效率及其在PC3细胞中的表达。方法：以人前列腺癌PC3细胞基因组cDNA为模板PCR扩增获得目的基因DAB2 IP片段后，应用基因重组技术将目的片段克隆到 PC3-pSin慢病毒表达载体，经PCR、双酶切和测序鉴定后，重组慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293 FT细胞，获得携带 DAB2 IP基因的重组慢病毒。取病毒上清感染人前列腺癌PC3细胞，以PC3-pSin-EF2为对照，分别采用 RT-QPCR、Western blotting法检测 DAB2IP在靶细胞中的表达水平。结果：重组慢病毒质粒 pSin-EF2-Puro-DAB2IP经PCR、EcoRⅠ和Nhe Ⅰ双酶切鉴定结果与目的基因条带吻合，克隆测序结果与 NCBI收录的DAB2IP基因序列（NM_138709）完全一致。重组慢病毒质粒转染293FT细胞收获慢病毒上清可高效感染 PC3细胞，对照组细胞株PC3-pSin-EF2及过表达细胞株 PC3-pSin-EF2-DAB2 IP内 DAB2IP 基因的相对拷贝数分别为0.001±0.000和0.158±0.013，与对照组细胞比较，过表达细胞内DAB2IP基因mRNA表达水平上调（179.37±15.89）倍，差异有统计学意义（P＜0.001）；Western blotting 法，对照组PC3-pSin-EF2细胞中DAB2IP蛋白表达水平为内参的（1.002±0.783）倍，PC3-pSin-EF2-DAB2IP

作者：华兴；潘文海

来源：吉林大学学报（医学版） 2014 年 5期