目的:利用基因重组技术获得三重靶向性Smac过表达的条件复制型腺病毒,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响.方法:利用重组技术构建Smac过表达载体pShuttle-Egr1-Smac-HRE-hTERT-E1 A-E1Bp-E1B55K,与骨架载体pAdEasy在BJ5183 (AdEasy-1+)菌中进行重组,获得Smac过表达的条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac,感染MDA-MB-231细胞后,利用化学试剂氯化钴模拟肿瘤细胞乏氧状态,设立对照组、CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组,并根据是否进行4 Gy照射,每组分为未照射组和照射组,共8个实验组.利用Western blotting法检测各组细胞Smac蛋白的表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡率和不同周期进程细胞百分率.结果:Western blotting法检测,经条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac感染、乏氧和照射后,Smac蛋白表达水平增加,CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组Smac蛋白表达水平最高.流式细胞术检测,与对照组比较,CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01);与相应未照射组比较,4 Gy照射后CARd.pE-Smac+4 Gy组、乏氧+4 Gy组和CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01),CARd.pE-Smac+乏氧+4 Gy组升高最为明显,且S期和G2/M期细胞百分率明显增加(P<0.05或P<0.0
作者:齐亚莉;刘扬;梁硕;龚守良;王志成;刘威武
来源:吉林大学学报(医学版) 2018 年 44卷 1期