目的:探讨在具有T790M突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除程序性细胞死亡配体1(PD-L1)后对吉非替尼耐药敏感性的影响,阐明PD-L1对PC-9/T790M细胞耐药敏感性的作用机制.方法:常规体外培养PC-9细胞和PC-9/T790M细胞,经CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除PC-9/T790M细胞中PD-L1后,分为PC-9、PC-9/T790M和Cas9 PC-9/sgRNA 3组细胞.采用Western blotting法检测各组细胞中PD-L1蛋白表达水平,CCK-8法检测5、10和20 mmol·L-1吉非替尼干预24、48和72 h后各组细胞存活率.体内实验中检测吉非替尼干预后各组移植瘤体积,HE染色观察移植瘤组织病理形态表现.结果:Western blotting法检测,经CRISPR/Cas9编辑后敲除PD-L1的sgRNAl#组与PC-9、PC-9/T790M、sgRNA2#和sgRNA3#组比较,PD-L1蛋白表达水平最低.CCK-8法检测,在应用药物干预前Cas9 PC-9/sgRNA组细胞增殖活性与PC-9组、PC-9/T790M组比较,差异无统计学意义(P>0.05),10 mmol·L-1吉非替尼干预72 h后PC-9组和Cas9 PC-9/sgRNA1#组细胞存活率与PC-9/T790M组比较明显降低(P<0.01).体内实验,与PC-9/T790M组比较,吉非替尼干预后PC-9组和Cas9 PC-9/sgRNA1#组裸鼠移植瘤体积明显减少(P<0.05);PC-9组和Cas9 PC-9/sgRNA1#组移植瘤细胞呈现中、重度坏死,而

作者：任爱华；刘婉；王大伟

来源：吉林大学学报（医学版） 2021 年 47卷 2期