目的:基于CRISPR/Cas9技术构建低密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除的免疫缺陷小鼠模型,并对血液胆固醇水平进行分析评价,为构建具有高脂血症的免疫系统人源化小鼠模型提供新方法.方法:基于CRISPR/Cas9技术,将有效识别LDLR基因外显子2和18的sgRNA/Cas9 mRNA注射到NOD SCID小鼠的受精卵中,通过对新生小鼠基因型鉴定筛选得到基因敲除的F0代阳性(LDLR+/-,Aa)小鼠,再将此小鼠与NOD SCID(LDLR+/+,AA)小鼠繁育,鉴定得到能稳定遗传基因型的F1代(Aa)小鼠.将F1代阳性杂合小鼠与NOD SCID小鼠繁育,获得大量基因序列完全相同的F2代(Aa)小鼠,在F2代间进行大规模繁育,获得的F3代小鼠依据基因型和性别进行分组,分别为雄性AA、雄性Aa、雌性AA和雌性Aa,对体质量进行监测,同时采集外周血进行血液胆固醇水平检测.结果:通过上述构建方法获得了NOD SCID LDLR+/-(Aa)小鼠,经过8周的体质量检测,Aa杂合子基因型在生长发育过程中并不影响小鼠体质量,雌性Aa的胆固醇水平为(100.80±4.42)mg·dL-1,雄性Aa的胆固醇水平为(120.56±11.16)mg·dL-1,与阴性对照(基因型为AA的小鼠)比较,胆固醇水平明显升高(P<0.05);雌性AA的胆固醇水平为(60.78±2.11)mg·dL-1,雄性AA的胆固醇水平为(75.43±10.06)mg·dL-1,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).

作者：王兆卫；吕亚楠；胡正；杨永广

来源：吉林大学学报（医学版） 2022 年 48卷 2期