目的 构建转录因子NF-κB的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路及以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNAi质粒.方法 设计针对NF-κB的shRNA特异性序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体,EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切及DNA测序鉴定重组克隆;脂质体转染RNAi重组载体至前列腺癌细胞PC-3后,Western blot分析各组NF-κB蛋白表达水平.结果 双酶切和DNA测序证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒; Western blot结果显示与空质粒对照组比较NF-κB转染组细胞NF-κB表达明显下调.结论 成功构建人NF-κB基因RNAi质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒,为靶向NF-κB的基因治疗提供了有力工具.
作者：方淑环；龚青
来源：重庆医学 2012 年 41卷 33期
