目的：制备特异性抗组氨酸标签（His-tag）的单克隆抗体（mAb）并进行鉴定。方法以合成的15个组氨酸的多肽耦联牛血清清蛋白（BSA）为抗原免疫Balb/c小鼠，按常规方法进行细胞融合。采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性克隆及有限稀释法进行克隆化，用Protein G柱亲和纯化抗体及ELISA 检测纯化抗体的效价、相对亲和力及抗体亚类，用ELISA及Western blotting对mAb的特异性进行鉴定，并与含His-tag的重组蛋白特异性抗体配对建立双抗夹心ELISA定量检测对应的重组蛋白。结果筛选出5株能稳定分泌抗 His-tag的杂交瘤细胞株，抗体亚类均为IgG1（κ），其中1-G2亲和力最高（1．27×1010），并且1-G2在ELISA及 Western blotting中能与不同类型的含 His-tag的重组蛋白结合，能与降钙素原（PCT ）抗体构建双抗夹心ELISA定量检测含 His-tag的PCT重组蛋白，灵敏度达到4．6 ng/mL。结论成功制备了特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗His-tag的mAb ，该抗体能应用于ELISA及 Western blotting等多种 His-tag的检测方法，为蛋白质研究检测、定位、相互作用等提供了工具。
作者：戚大梁；王强；易维京
来源：重庆医学 2013 年 32期
