目的:建立一种准确且对细胞活性干扰少的分离人肠道组织中CD3+CD4+ T淋巴细胞的分选方法。方法首先用消化酶分解人肠道组织,40μm细胞滤器过滤获得细胞悬液。Percoll连续密度梯度离心法分离细胞悬液收集单个核细胞,然后通过流式细胞仪分选法(FACS )分选单个核细胞中的CD3+CD4+ T淋巴细胞。分选后的细胞采用细胞存活率、细胞纯度和形态观察对分选方法进行评价。结果消化酶能够很好地分解人肠道组织获得细胞悬液,Percoll连续密度梯度离心法收集的单个核细胞中CD3+CD4+ T淋巴细胞纯度为(43.9±7.3)%,FACS分选后CD3+ CD4+ T 淋巴细胞纯度为(96.9±1.2)%,差异有统计学意义(P<0.01)。分选后的细胞存活率为(97.8±1.6)%,细胞的形态保持完整。结论 Percoll连续密度梯度离心法联合FACS收集人肠道组织的CD3+CD4+ T淋巴细胞纯度高,且对细胞形态和存活率影响小并可在无菌条件下进行,分选的细胞可继续用于其他功能的研究。
作者:蒋就喜;康伟芳;王雪雯;孔衍琳;张帅
来源:重庆医学 2014 年 2期