目的 探讨沉默信息调节因子1(Sirt1)调控软骨细胞自噬在骨关节炎(OA)中作用及机制的研究.方法 免疫组织化学及逆转录PCR(RT-PCR)法检测人OA软骨和正常软骨中Sirt1的表达,Ⅱ型胶原酶消化软骨获得软骨细胞,单丹磺酰尸胺(MDC)法检测OA软骨细胞及正常软骨细胞自噬水平,并分析二者相关性;Sirt1激动剂白藜芦醇干预OA软骨细胞,并通过MDC法检测OA软骨细胞自噬水平,Western blot及RT-PCR法检测酵母自噬基因Atg/Vps30同源基因(Beelin-1)及微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白及mRNA表达水平,烟酸己可碱(Hoechst)染色检测OA软骨细胞凋亡情况,Western blot检测B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路激活情况,分光光度法检测各组天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)活性.结果 OA软骨中Sirt1蛋白及mRNA表达量都显著低于正常软骨中表达量(P＜0.01),OA软骨细胞自噬水平低于正常软骨细胞(P＜0.01),OA中软骨Sirt1表达量与自噬水平正相关;Sirt1激动剂白藜芦醇能显著提高OA软骨细胞自噬水平(P＜0.01),提高自噬基因Beclin-1及LC3蛋白及mRNA表达量(P＜0.01),并抑制mTOR磷酸化(P＜0.01),从而抑制OA软骨细胞凋亡(P＜0.01),下调Bax表达(P＜0.01),上调Bcl-2表达(P＜0.01),降低Caspase-3活性(P＜0.01).

作者：李春亮；李钊伟；秦凤

来源：重庆医学 2016 年 45卷 15期