目的：分析HBV反转录酶（RT）区rtA181S变异与阿德福韦酯（ADV）耐药的相关性。方法应用直接测序法筛选分析大样本慢性HBV感染者rtA181S变异的检出频率，并对1例接受ADV单药治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中HBV RT区基因进行克隆测序，分析相关变异形式。用XhoⅠ和SphⅠ双酶切pGEM-Teasy RT及pTriEx-HBV(C)载体后再连接，构建1.1倍HBV野生株和耐药株的重组质粒，转染人肝癌细胞系HepG2细胞，5 h后分别加入不同浓度的 ADV（0、0.033、0.100、0.330、1.000、3.300μmol/L）。隔天换药，4 d后收集细胞上清，采用实时荧光定量PCR法检测不同药物浓度作用下细胞培养上清中的HBV DNA载量，并分析其表型耐药特点。结果9830例慢性HBV感染者的12000个血清样本中，有46例样本检出rtA181S变异（单独或与其他耐药变异联合出现），在653例中检出经典的rtN236T/A181V变异。其中随访的1例在接受ADV治疗19个月后出现了病毒学和生化学突破，直接测序检出rtA181S+N236T变异，克隆测序分析显示在24个克隆中11个（45.83
作者：杨菁；刘妍；陈容娟；许智慧；陈丽；辛绍杰；刘新光；徐东平
来源：传染病信息 2013 年 6期
