目的重新设计并人工合成抗NI-35重组单链抗体(anti-NI-35-scfv)的cDNA克隆,构建其表达载体,在原核系统中实现初步表达.方法根据genebank中发表的anti-NI-35抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段,该基因双链分35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到克隆载体pUC-18中,经全自动序列分析仪测序证实后,再亚克隆至表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,诱导表达.结果测序结果是合成的基因序列与设计的仅差一个碱基; SDS-PAGE检测显示,表达出相对分子量31kD的融合蛋白,并得到了良好的生物活性.结论抗NI-35重组单链抗体(IN-1-scFv)基因表达载体的构建和表达,为深入研究anti-NI-35-scFv应用于神经系统损伤和修复奠定了基础.
作者：王运杰；王勇；孙涛；吴安华；郑伟；公茂青；张修维
来源：创伤外科杂志 2004 年 6卷 1期
