目的:使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达.方法: 利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO 和 pEF-EPO,分别用 DEAE-dextran 法转染COS7细胞,作瞬时高表达,选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染 CHO-dhfr-细胞,加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择,作稳定性高表达. 结果: pED-EPO 和 pEF-EPO转染COS7细胞后72 h表达量分别为17.8和21.0 ng/ml,pEF-EPO 转染 CHO-dhfr-细胞,随着MTX浓度的增加,CHO-dhfr+的克隆数减少,而混合克隆的EPO表达量逐渐升高.筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株,其3 d表达量为16 μg/ml.结论:rhEPO在CHO细胞中获得了高表达.
作者：陈坚；刘小萍；曹韫旭；陆德如
来源：第二军医大学学报 1998 年 19卷 6期
