目的:研究人外周血粒细胞褪黑素受体(melatonin receptor,MR)亚型的基因与蛋白表达的特点.方法:通过密度梯度离心法分离得到健康成年人外周血粒细胞,采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA,分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA,并将RT-PCR的阳性产物通过自动测序仪测序;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在粒细胞内的分布特点.结果:Northern印迹方法检测出长约1.1 kb的mt1 mRNA,但未检出长约1.1 kb的MT2 mRNA;RT-PCR方法则得到了约370 bp的mt1 cDNA片段,无320 bp的MT2 cDNA片段,mt1阳性条带测序结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血粒细胞存在mt1受体蛋白,主要分布于细胞膜和细胞质,呈棕褐色阳性颗粒,而细胞核上几乎未见阳性颗粒,MT2受体蛋白则未检出.结论:证实正常人外周血粒细胞存在mt1亚型的基因与蛋白的表达,而无MT2亚型的基因与蛋白的表达,提示外周血粒细胞为褪黑素(melatonin,Mel)作用的外周靶器官.
作者：陈向芳；刘志民；林炜栋；赵瑛
来源：第二军医大学学报 2003 年 24卷 5期
