目的:构建靶向于SW1990细胞K-ras exon 1序列的反义RNA腺病毒,观察其对SW1990细胞的增殖和凋亡的影响.方法:将K-ras exon 1 cDNA克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV,筛选出反向插入的克隆,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒.腺病毒重组质粒转染293细胞进行包装,产生重组腺病毒.腺病毒载体Ad-LacZ转染SW1990细胞,X-gal染色观察感染效率.重组腺病毒感染体外培养的SW1990细胞,MTT法检测SW1990细胞增殖,AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测SW1990细胞凋亡.结果:所构建的重组腺病毒PCR扩增出282 bp的目的基因片段;制备出了高滴度重组病毒,CsCl2密度梯度纯化前后病毒滴度分别为7.6×108pfu/ml和5.0×1010 pfu/ml,当MOI=100时对SW1990的感染效率接近100
作者：吕纯业；邵成浩；胡先贵
来源：第二军医大学学报 2007 年 28卷 5期
