目的 通过脂质体转染siRNA方法沉默人肺鳞癌细胞NCI-H226中UbcH10基因,观察基因沉默后细胞增殖活性的变化及其对细胞周期的影响.方法 设计3条针对UbcH10基因CDS区不同位点的siRNA序列并构建shRNA重组质粒,脂质体法转染重组质粒至NCI-H226细胞.转染后48h,RT PCR和蛋白质免疫印迹法检测细胞内UbcH10 mRNA及蛋白含量.使用有效siRNA序列转染细胞,转染后24、48 h CCK 8检测细胞活性.使用有效siRNA序列转染细胞,转染后48 h收集细胞,流式细胞术检测细胞周期.结果 成功构建shRNA重组质粒并转染NCI-H226细胞.转染siRNA 48 h后,3组NCI-H226细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白含量均明显下降；其中2号siRNA序列(pshRNA2)的沉默效果最好,UbcH10基因剩余表达量为对照组的14％.使用pshRNA2转染NCI-H226细胞24、48 h,细胞增殖活性降低,与基因未干预组比较差异有统计学意义(P＜0.05).使用pshRNA2转染NCI-H226细胞48h,细胞明显阻滞于G2期,与基因未干预组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 UbcH10基因沉默可显著抑制NCI-H226细胞增殖活性,并使肺癌细胞阻滞于细胞G2期.
作者：赵黎明；孙光远；娄丽蓉；王良哲；方正；修清玉
来源：第二军医大学学报 2012 年 33卷 6期
