目的 明确法舒地尔(fasudil)能否阻断Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)激活导致的C2C12成肌细胞呼吸功能异常介导的肌肉萎缩.方法 体外培养C2C12成肌细胞,给予2%的马血清诱导分化为成熟肌小管细胞.然后根据给予不同处理将其分成4组:Ad-GFP组,仅感染GFP腺病毒载体;Ad-RCCK1组,感染ROCK1腺病毒载体诱导细胞过表达ROCK1;Ad-GFPF组,感染GFP腺病毒载体,并给予10μmol/L法舒地尔刺激;Ad-ROCK1F组,感染ROCK1腺病毒载体诱导细胞过表达ROCK1,并给予10 μmol/L法舒地尔刺激.通过Seahorse能量代谢分析仪评估不同刺激条件下C2C12成肌细胞的细胞耗氧率(OCR)及胞外酸化率(ECAR),以明确ROCK1过表达和法舒地尔刺激对C2C12成肌细胞呼吸功能的影响.采用MitoTracker(R)红色荧光探针测定线粒体裂变情况.用蛋白质印迹法检测ROCK1、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)及其磷酸化蛋白p-Drp1、肌肉萎缩相关蛋白E3泛素连接酶肌肉环指蛋白1(MuRF1)和肌肉萎缩F-box(MAFbx,又称Atrogin1)的表达.结果 Seahorse分析结果显示,与AdGFP组比较,Ad-ROCK1组C2C12成肌细胞OCR及ECAR明显增加,细胞的基础呼吸、最大呼吸及偶联ATP产生所需的呼吸增加,差异均有统计学意义(P<o.01);MitoTracker(R)荧光探针结果显示Ad-ROCK1组细胞线粒体裂变增加,线粒体
作者:郭织运;张杰;董睿;许静
来源:第二军医大学学报 2017 年 38卷 6期