目的 对采用原位杂交检测10％ 中性甲醛溶液固定的石蜡包埋(FFPE)胰腺癌组织切片中微RNA(miR)的方法进行技术优化,以提高miR的阳性检出率.方法 将20例胰腺癌组织标本构建成组织芯片,使用锁核酸(LNA)标记的探针和显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达.杂交温度分别设为48℃、53℃、56℃,杂交后采用3种不同的洗涤条件(温度、时间和3种不同洗涤缓冲液)进行杂交条件优化.将126例胰腺癌组织标本制成组织芯片,采用优化的显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达.结果 miR-21探针最佳杂交条件为杂交温度53℃ 下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ在65℃ 下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min;miR-34a探针最佳杂交条件为杂交温度53℃ 下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ分别在4℃ 和65℃ 下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min.在126例胰腺癌组织中,84例(66.7％)miR-21表达阳性,77例(61.1％)miR-34a表达阳性.结论 在FFPE胰腺癌组织切片中,miR-21和miR-34a的最佳杂交温度均为53℃,选择合适的杂交后洗涤温度和洗涤缓冲液有利于提高miR的阳性检出率.
作者：倪晨明；倪灿荣；金钢；焦莉娟；李连峰；郑建明
来源：第二军医大学学报 2018 年 39卷 12期
