目的 构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性.方法 构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点ori R6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ4paⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-Sac Ⅱ-BgtⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段.载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性.结果 成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株.结论 本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的 基凶的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用.
作者：王景；穆媛媛；黎庶；陈志瑾；熊坤；丛延广
来源：第三军医大学学报 2009 年 31卷 23期
