目的 利用串联亲和纯化技术筛选与肠病毒71型3D聚合酶相互作用的宿主细胞蛋白.方法 利用RT-PCR方法从EV71BrCr株全基因组中获得3D聚合酶全长基因,构建pcDNA3.0-3D-Flag-HA真核表达载体并转染RD细胞,48 h后收集细胞.用Western blot方法检测3D蛋白在RD细胞内的表达情况.串联亲和纯化技术筛选与3D聚合酶相互作用的宿主蛋白并进行质谱分析,确定与3D聚合酶相互作用的蛋白或多肽.并采用免疫共沉淀实验,对候选蛋白CyclinG1与3D的相互作用进行验证.结果 成功构建了pcDNA3.0-3D-Flag-HA载体,在RD细胞内检测到3D蛋白的表达.经串联亲和纯化和质谱分析得到LATS2、Nek2、APC5、CyclinG1、PI3K等一系列参与细胞凋亡及细胞周期调控的蛋白.免疫共沉淀实验证实3D蛋白与CyclinG1的相互作用.结论 3D聚合酶可能与宿主细胞内蛋白相互作用,引起细胞凋亡及细胞周期改变.
作者：江月；丛浩龙；王健；李梨
来源：第三军医大学学报 2012 年 34卷 6期
