目的 构建内质网跨膜蛋白肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme 1 α,IRE1α)基因干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒,并探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)状态下其对C2C12细胞增殖凋亡的影响.方法 人工合成靶向IRE1α的siRNA序列,连接到穿梭载体pSES-HUS上,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中进行同源重组,得到pAdSES-HUS-IRE1αsiRNA重组质粒.通过脂质体介导在HEK293细胞中包装并扩增重组腺病毒Ad-IRE1α siRNA,在C2C12细胞中采用RT-PCR和Western blot检测其干扰效果,并通过FCM法和MTT检测Tm诱导ERS时病毒对C2C12细胞增殖凋亡的影响(分为4组:NC组、Tm单独处理组、Tm+ Ad-RFP组和Tm+ Ad-IRE1 α siRNA组),Western blot检测C2C12细胞中Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达.结果 成功获得了病毒滴度约为4.3×1011 PFU/mL的重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA.RT-PCR和Western blot检测结果表明,该重组腺病毒有效地抑制了C2C12细胞中IRE1α的表达.FCM检测结果表明,ERS条件下,Tm+ Ad-IRE1α siRNA组S期的细胞比例分别比Tm单独处理组和Tm+ Ad-RFP组升高12.62％和14.80％ (P ＜0.05);凋亡率比Tm单独处理组和Tm+ Ad-RFP组降低16.64％和16.26％ (P ＜0.05).MTT实验结果与Cle

作者：韩晓凤；李美玲；张鹏；夏飞；郭风劲

来源：第三军医大学学报 2014 年 36卷 11期