目的 探讨缺氧预处理骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的外泌体(exosomes)调控心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMVECs)增殖的机制.方法 采用酶消化法联合差速贴壁法培养大鼠CMVECs,超高速离心法提取常氧及缺氧预处理的BMSCs exosomes,免疫荧光检测CMVECs内化exosomes情况.实验分为4组(n=3):①正常对照组(Control),②去除exosomes后的BMSCs条件培养基的空白对照组(Free-Exos),③常氧外泌体组(Nor-Exos),④缺氧外泌体组(Hypoxia-Exos,外泌体浓度为400 μg/μL,与CMVECs共培养24 h).采用Edu法及流式细胞术细胞周期法检测细胞增殖能力,qRT-PCR检测exosomes和CMVECs各组中miR-214表达变化.抑制exosomes中miR-214后,qRT-PCR检测exosomes及CMVECs中miR-214的表达变化,并观察细胞增殖情况.结果 经透射电镜及免疫印迹法验证提取的囊泡状物质为外泌体,并通过免疫荧光分析发现DiI标记的exosomes可被CMVECs内化;Edu及细胞周期结果显示,Hypoxia-Exos组较Nor-Exos组具有更强的促CMVECs增殖能力(P＜0.05).qRT-PCR结果显示,与Nor-Exos组比较,Hypoxic-Exos组中miR-214表达显著升高(P＜0.05).下调Hypoxia-Exos中的miR-214表达后,Edu及细胞周期结果显示Hypoxia

作者：李朝富；王艳；赵然尊；龙仙萍；张巍；陈攀科；石蓓

来源：第三军医大学学报 2019 年 41卷 23期