目的 探究Fox01不同磷酸化位点在低氧暴露下大鼠L6成肌细胞蛋白质合成和分解中的调节作用.方法 构建FoxO1过表达、Fox01 T24A/D、FoxO1 S250A/D、Fox0 1S313A/D位点的质粒,使用腺病毒作为载体,分别感染分化后的大鼠L6骨骼肌细胞6h,将细胞分别命名为rFox01、T24A、T24D、S250A、S250D、S313A、S313D,并对应分为7个转染组,以转染空白对照质粒作为对照组(EGFP),随后将各转染组再分为常氧组(normoxic group,C)和低氧组(hypoxic group,H).采用荧光共聚焦显微镜观察腺病毒转染情况;采用Western blot对嘌呤霉素(puromycin)结合多肽进行分析,并对泛素(ubiquitin)标记蛋白和分解相关蛋白表达进行检测.结果 与C-EGFP组相比,C-rFoxO1组puromycin结合多肽(1.38±0.06)、mTOR(1.54±0.21)和p-mTOR(1.57±0.34)表达显著增加(P＜0.05).与C-EGFP组相比,C-T24D组mTOR(1.33±0.35)和p-mTOR(1.60± 0.44)表达显著上升(P＜0.01);与C-T24D组相比,H-T24D组mTOR表达显著降低(P＜0.01).与C-EGFP组相比,C-S250A组蛋白质积累显著上升(P＜0.01),与C-S250A组相比,H-S250A组蛋白质积累显著下降(P＜0.05).与EGFP组相比,S313A和S313D组蛋白质积累差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FoxO1通过上调mTOR活性来增加蛋白质合成,但受低氧调控;低

作者：贾杰；付鹏宇；朱镕鑫；许春艳；龚丽景

来源：第三军医大学学报 2020 年 42卷 15期