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目的 观测长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA) LOC100360491(后简称LOC 100360491)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响,探讨其潜在作用机制.方法 ①通过慢病毒转染大鼠H9c2心肌细胞构建过表达及抑制LOC 100360491的心肌细胞系,分为4组:空白对照组、过表达LOC 100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组,qRT-PCR检测各组LOC 100360491的表达.②将慢病毒转染的大鼠H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6h处理以观察LOC 100360491对该细胞凋亡的影响,分为5组:空白对照组、缺氧复氧组、过表达LOC 100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻与凋亡中期线粒体活性氧释放情况;Western blot检测各组细胞中凋亡效应蛋白procaspase3、cleaved-caspase3、促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.③采用qRT-PCR检测各组PAK3及CNNM2基因的表达以探讨LOC 100360491的潜在调控机制.结果 ①qRT-PCR结果显示:与空载体组相比,过表达LOC 100360491组LOC 100360491表达显著上调(P<0.05),抑制LOC100360491组LOC 100360491表达显著下调(P<0.05).表明细胞系构建成功.②流式细胞术及Western blot结果显示,与缺氧复氧组相比,过表达LOC100360491组H9c2细胞早期凋亡、活

作者:郭鸿浩;邓文文;龙禹哲;杨双亚;赵永超;石蓓

来源:第三军医大学学报 2020 年 42卷 18期

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郭鸿浩;邓文文;龙禹哲;杨双亚;赵永超;石蓓
来源:
第三军医大学学报 2020 年 42卷 18期
标签:
长链非编码RNA LncRNA LOC100360491 心肌细胞 缺氧复氧 细胞凋亡
目的 观测长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA) LOC100360491(后简称LOC 100360491)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响,探讨其潜在作用机制.方法 ①通过慢病毒转染大鼠H9c2心肌细胞构建过表达及抑制LOC 100360491的心肌细胞系,分为4组:空白对照组、过表达LOC 100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组,qRT-PCR检测各组LOC 100360491的表达.②将慢病毒转染的大鼠H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6h处理以观察LOC 100360491对该细胞凋亡的影响,分为5组:空白对照组、缺氧复氧组、过表达LOC 100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻与凋亡中期线粒体活性氧释放情况;Western blot检测各组细胞中凋亡效应蛋白procaspase3、cleaved-caspase3、促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.③采用qRT-PCR检测各组PAK3及CNNM2基因的表达以探讨LOC 100360491的潜在调控机制.结果 ①qRT-PCR结果显示:与空载体组相比,过表达LOC 100360491组LOC 100360491表达显著上调(P<0.05),抑制LOC100360491组LOC 100360491表达显著下调(P<0.05).表明细胞系构建成功.②流式细胞术及Western blot结果显示,与缺氧复氧组相比,过表达LOC100360491组H9c2细胞早期凋亡、活