目的 探讨叶酸缺乏抑制发育关键基因Brachyury表达的表观调控机制及对拟胚体(embryoid bodies,EBs)分化的影响.方法 建立叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESCs)分化为EBs的细胞模型.根据叶酸浓度分为3组:正常组,叶酸缺乏组和叶酸补充组.采用massARRAY和RT-PCR分别检测EBs中Brachyury基因的甲基化和表达水平,明确叶酸缺乏对Brachyury 基因表达的影响;RT-PCR和ChIP-qPCR分别检测DNA甲基化酶的表达和组蛋白甲基化修饰,探讨叶酸缺乏对Brachyury基因的表观调控机制;检测多潜能markers和三胚层markers的表达,探讨发育关键基因Brachyury表达异常对EBs分化的影响.结果 ①在叶酸缺乏的ESCs分化为EBs模型中Brachyury表达显著降低,叶酸缺乏组的相对表达量为正常组的(0.19±0.08)倍,叶酸补充后上升至正常组的(0.62±0.14)倍.EBs中Brachyury基因启动子区甲基化水平从正常组的(30.75±0.50)%升高至叶酸缺乏组的(37.93±1.24)%,补充叶酸后则降低至(31.88±2.67)%.②DNA从头甲基化酶
DNMT3b表达升高,叶酸缺乏组其相对表达量为正常组的(1.59±0.31)倍.叶酸缺乏的EBs中H3K27me3修饰增加,正常组、叶酸缺乏组、叶酸补充组的相对富集程度分别为(0.22±0.03)、(0.32±0.02)、(0.24±0.01).③在叶酸缺乏ESCs分
作者:常韶燕;郭九叶;陈燕;王理
来源:陆军军医大学学报 2022 年 44卷 14期