目的: 构建特异性切割c-myc基因mRNA的锤头状核酶(Ribozyme)真核表达载体,探讨核酶对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法: 计算机分析大鼠c-myc基因mRNA的二级结构,选择第2029位点作为锤头状核酶的切割位点并设计相应的核酶.采用DNA合成仪合成核酶基因,以克隆技术将核酶基因构建入pGEM3Zf(+)体外转录载体,以Sanger双脱氧末端终止法测定核酶基因的序列后,通过亚克隆将核酶基因构建入pcDNA3真核表达载体;核酶真核表达载体以阳离子脂质体LipofectAMINE作为介导,转染体外培养的第5代SD大鼠VSMCs,经G418筛选出细胞克隆,流式细胞仪测定VSMCs的细胞周期.结果: 核酶基因准确克隆入pGEM3Zf(+)载体,DNA序列测定表明所克隆入的核酶基因序列正确;经过亚克隆将核酶基因准确克隆入pcDNA3载体(pcDNA-Rz);pcDNA-Rz转染VSMCs经G418筛选出多个抗性细胞克隆,扩大培养获得转染细胞;细胞周期分析显示,pcDNA-Rz转染细胞的细胞周期有明显变化,S期和G2/M期比率明显减少,细胞生长阻滞于G0/G1期,细胞增殖指数明显降低.结论: 特异性切割c-myc基因mRNA核酶对体外培养VSMCs的增殖具有明显的抑制作用.
作者：栾荣华；贾国良；李伟；贾战生；连建奇
来源：第四军医大学学报 2003 年 24卷 6期
