目的: galU基因是肺炎链球菌荚膜合成的关键基因,构建该基因的缺失突变体,获得肺炎链球菌荚膜缺陷菌株,研究其生物学功能,并为肺炎链球菌功能基因组研究提供实验菌株和技术平台. 方法:采用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法制备中间为红霉素耐药基因(erm),两侧为galU基因上、下游同源序列的连接片段,并将此片段转化入肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出缺陷菌株.用PCR鉴定缺陷菌株,小鼠实验研究其毒力.结果: PCR结果显示galU基因完全被erm基因所替代,小鼠毒力实验表明缺陷菌株毒力显著下降.结论: galU缺失突变体在小鼠体内不能形成荚膜导致其难以在小鼠体内存活,可作为筛选肺炎链球菌体内诱导启动子的宿主菌.用LFH-PCR作基因突变,可完全替代靶基因,简便、快速,是肺炎链球菌功能基因组研究的一种有效的方法.
作者：孟江萍；尹一兵；袁军；张雪梅；蓝锴；陈淑惠；王虹；涂植光
来源：第四军医大学学报 2004 年 25卷 24期
