随着规模化和集约化养牛业的不断发展,多种致病菌混合感染造成牛腹泻严重制约了养牛业的快速发展,对腹泻病原进行快速准确鉴别诊断对疫病防控至关重要.根据沙门氏菌的ivnA 基因、大肠埃希氏菌的 23SrRNA基因、产气荚膜梭菌的plc 基因以及志贺氏菌的ipaH 基因的保守区域建立了可同时检测这 4 种细菌的多重荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和重复性进行了研究.结果显示,建立的标准曲线线性关系良好;优化后的检测方法仅可特异性扩增出 4 种目标细菌;对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌和产气荚膜梭菌的最低检出限分别为 9.4×101 copies/μL、1.2×102 copies/μL、9.1×101 copies/μL和 1.4×103 copies/μL,该方法的灵敏性高于普通单项 PCR 检测方法 10 倍;批内、批间差异均小于 5％.用此方法检测人工感染病料,每份病料均检测出对应攻毒细菌的荧光信号.以上结果表明,所建立的多重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于致牛腹泻细菌的实验室检测.
作者：高睿；徐伟；罗艳；谢晓刚；李梦磊；张琪；许信刚
来源：动物医学进展 2023 年 44卷 6期
