目的 探讨高糖对小鼠足细胞podocalyxin表达的影响及结缔组织生长因子(CTGF)参与其损伤的可能机制.方法 构建针对CTGF基因的特异性siRNA质粒并转染至小鼠足细胞.将体外培养的足细胞分为6组(1)正常对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1 g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:足细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:足细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:足细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养.Western blot方法检测小鼠足细胞Podocalyxin、CTGF蛋白表达及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平.结果 高糖培养足细胞24、48 h时均可下调其Podocalyxin蛋白表达量(P<0.05).并可诱导CTGF蛋白表达增加(P<0.05).同时高糖可以活化足细胞ERK1/2信号途径,在高糖刺激30 min时开始活化,持续活化至24 h.特异性siRNA干扰CTGF合成后,ERK1/2活化减少,并且足细胞Podocalyxin表达升高.结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,可通过ERK1/2途径诱导podocalyxin表达下降,针对CTGF的siRNA能明显改善podocalyxin表达量,为DN的治疗提供新的思路.
作者:章俊;李萍华;杨蕾;杜庆生;郭婷婷;汤珣
来源:南方医科大学学报 2011 年 31卷 5期