目的:探讨ApoE4与GSK-3β及Tau蛋白超磷酸化之间的关系,为研究ApoE4在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制提供实验依据。方法分别将对照质粒载体pIRES-EGFP、重组质粒ApoE4/pIRES-EGFP和ApoE3/pIRES-EGFP转染U87脑星形胶质细胞系,用免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白水平的变化。在U87细胞中转入干扰ApoE表达的siRNA(ApoE-siRNA)及对照siRNA,检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白的改变情况。将质粒转染前后及siRNA干扰前后目标蛋白的含量或磷酸化水平的改变进行统计学比较。结果与对照组相比,GSK-3β蛋白水平的相对值分别为:ApoE4组(1.819±0.130,P<0.01,n=3)和ApoE3组(1.336±0.130,P<0.01,n=3),差异具显著差异,且ApoE4和ApoE3组比较也具有显著性差异(P<0.01)。同样,相对于对照组,ApoE4和ApoE3组的磷酸化Tau蛋白(p-Tau)的相对值分别为1.587±0.027(P<0.01,n=3)和1.436±0.026(P<0.01,n=3),均具显著差异;且ApoE4组较ApoE3组的促进作用更强,两组间具显著差异(P<0.01)。此外,用ApoE-siRNA干扰后,U87细胞中GSK-3β的表达和p-Tau水平均较对照组显著降低,分别为0.544±0.058(P<0.001,n=3)和0.474±0.060(P<0.01,n=3)。结论 AD危险因子ApoE4可能
作者:何颜结;卫佩如;伍巧燕;张馨宇;张兴梅;刘晓加;王方
来源:南方医科大学学报 2016 年 36卷 7期