目的 选择野生型C57BL/6J小鼠为研究模型,利用CRISPR/Cas9技术建立Gata4基因H435Y突变型小鼠.方法 针对Gata4基因的基因序列信息设计针对Gata4基因H435Y位点的单链向导RNA(single-guideRNA,sgRNA),经活性检测后,将具有活性的sgRNA和Cas9体外转录成RNA,通过显微注射将sgRNA、Cas9 mRNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到小鼠受精卵中,通过PCR和基因测序方法对Gata4基因突变进行检测及鉴定,培育Gata4基因突变小鼠并分析后代的突变情况.结果 顺利构建sgRNA载体并体外转录,成功sgRNA、Cas9 mRNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到受精卵中.基因测序鉴定获得4只F0代初建鼠.选取阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠杂交,得到F1代鼠,再相互交配获得F2代鼠.PCR显示F2代鼠Gata4基因H435Y突变,成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠模型并传代繁育.结论 通过CRISPR/Cas9技术可以成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠动物模型.
作者：张慧；陈名武；方涛；张甜；倪文泉
来源：南方医科大学学报 2018 年 38卷 10期
