目的 通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1(TGF-β1/ILK/FSP1)信号通路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法 构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA.将NRK52E细胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组:细胞培养液加环孢素A 1 mg/L;TGF-β1干预组:阻断剂(SB431542)10μmol/L加环孢素A 1 mg/L;ILK干预组:阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L;阴性对照组:阴性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L.实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达.免疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数.结果 与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表达量均显著增加(P<0.05);TGF-β1干预组经SB431542处理后,TGF-β1、ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05);经ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05).α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较环孢素诱导组降低(P<0.05).结论 TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程.

作者：白志勋；陆静；杨亦彬

来源：南方医科大学学报 2019 年 39卷 7期