目的 构建基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌细胞体外侵袭的抑制作用.方法 筛选确定的MMP-9基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的pLVTHM载体连接产生LV2shMMP-9慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Southern印迹法检测喉癌细胞MMP-9蛋白表达.Boyden侵袭小室法实验观察转导后的喉癌细胞侵袭能力的变化.结果 成功构建MMP-9 shRNA的慢病毒载体LV2shMMP-9,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为8×1010TU/L.转导MMP-9 siRNA的喉癌细胞MMP-9蛋白表达阴性.MMP-9 siRNA转导后喉癌细胞体外侵袭能力下降.结论 成功构建人MMP-9基因RNAi慢病毒载体,MMP-9基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用.
作者：孙亚男；刘鸣；孙艳；田霖丽；焦慧
来源：中国耳鼻咽喉头颈外科 2008 年 15卷 7期
