背景与目的:NP9基因是我们在鼻咽癌中克隆到的一个新的表达下调的基因 ( GenBank 登录号: BF718797),为了进一步研究该基因的功能,我们构建了人 NP9基因编码区序列的真核表达质粒,并研究其表达对细胞周期素 D1(cyclin D1) 的影响.方法: 通过核苷酸同源序列比较( BlastN)得到 NP9 EST 的同源 cDNA, RT PCR扩增其编码区序列并构建真核表达重组质粒 pRc/CMV2 NP9,脂质体转染后 G418筛选出稳定、高效转录 NP9基因的细胞克隆;再通过脂质体转染 cyclin D1 promoter Luc和 NF κ B Luc质粒到稳定表达 NP9基因的细胞克隆,测定荧光素酶的活性以确定 NP9基因对 cyclin D1和 NF κ B转录活性的影响;同时亚克隆 NP9基因编码序列到载体 pEGFP C1中,脂质体转染细胞以确定 NP9蛋白在细胞中的定位.结果:融合的绿色荧光蛋白出现于细胞核. G418抗性克隆中, RT PCR扩增证实部分克隆表达 NP9基因,且强弱不同.表达 NP9基因的细胞克隆在瞬间转染 cyclin D1 promoter Luc和 NF κ B Luc 48 h后,荧光素酶的活性较其对照组分别下降 46
作者：刘启才；方嬿；李晓艳；梁卫江；曾益新
来源：癌症 2003 年 22卷 7期
