目的构建包含新型隐球菌细胞免疫主要相关基因--迟发超敏反应抗原基因(delayed-type hypersentivity antigen 1,DHA1)与小鼠共刺激分子B7-1的嵌合重组质粒.方法设计合成两对寡核苷酸引物,用PCR法分别从pUCmB7-1TM和新型隐球菌重组质粒pcDNA3-DHA1中特异扩增出编码B7-1和DHA1的基因片段(921 bp和984 bp),分别用HindⅢ,EcoRⅠ,XbaⅠ酶切后,逐个定向连接到质粒pcDNA3中,转化宿主菌DH-5α,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒.结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致,证实符合表达框架.结论该研究成功构建了新型隐球菌嵌合重组质粒pcDNA3-B7-1-DHA1,为进一步研究新型隐球菌DNA免疫奠定了基础.
作者：沈纪川；谢奇峰；翁锦生；顾琳；姚集鲁
来源：广东医学 2003 年 24卷 6期
