目的 构建白细胞分化抗原14(CD14)真核表达载体,建立重组质粒转染的胃癌SGC-7901细胞系,筛选并鉴定CD14稳定表达的细胞株并初步探讨CD14对胃癌细胞凋亡的影响.方法 利用PCR扩增人CD14编码区序列,使用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1-EGFP中,得到重组表达质粒pc DNA3.1-EGFP-CD14.双酶切及测序鉴定后,利用脂质体法将其转入人胃癌SGC-7901细胞中;G418筛选得到稳定转染细胞系;RT-PCR及Western blot鉴定转染前后CD14的表达;Hoechst染色检测细胞凋亡情况.结果 从胃癌SGC-7901细胞中成功克隆了CD14编码区;经双酶切及测序鉴定,pcDNA3.1-EGFP-CD14载体构建成功;成功筛选出CD14稳转细胞系,其mRNA表达量为未转染组的2.61倍(P<0.01),蛋白表达量为未转染组的1.88倍(P<0.01).Hoechst33258染色结果显示CD14稳定转染组出现了明显的细胞凋亡.结论 成功构建了CD14过表达载体,并获得了CD14稳定过表达的胃癌SGC-7901细胞株,CD14能够促进胃癌细胞的凋亡.
作者：李康；旦增；王中华；旺加
来源：广东医学 2013 年 34卷 22期
