目的：探讨TG2对缺氧型骨肉瘤MG－63细胞凋亡的影响。方法构建骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，共分为4组，单纯缺氧组：细胞培养在缺氧培养箱中；常氧组：细胞培养在常规氧浓度下；TG2 siRNA缺氧组：细胞先转染TG2 siRNA，接着培养于缺氧培养箱中；对照siRNA缺氧组：细胞先转染对照siRNA，接着培养于缺氧培养箱中。各组骨肉瘤MG－63细胞培养6、12、24、48和72 h，观察在缺氧培养条件下TG2对骨肉瘤MG－63细胞caspase－3表达和活性的影响，细胞浆和细胞核中细胞色素C含量的变化和细胞凋亡情况。 TG2活性使用微量滴定板法检测，TG2的mRNA转录水平使用qPCR检测，并采用免疫印迹（western blot）检测胞浆和胞核内caspase－3、TG2以及细胞色素C表达和分布情况；采用免疫组化（ SP法）分析细胞内TG2蛋白的分布情况，细胞凋亡率通过流式细胞仪检测。结果与常氧组比较，对照siRNA缺氧组和单纯缺氧组的TG2 mRNA、蛋白表达以及活性均显著提高（P＜0.01），在不同时间点差异有统计学意义；但caspase－3活性并未显著提高。然而胞浆内细胞色素C蛋白以及caspase－3的表达显著提高，细胞凋亡率轻度提高。与对照siRNA缺氧组比较，TG2 siRNA缺氧组的胞浆内细胞色素C蛋白表达水平以及caspase－3的活性显著改善（P＜0.01），细
作者：王建新
来源：广东医学 2015 年 13期
