目的 通过慢病毒载体沉默心肌细胞细胞系H9C2中C-SKI(c-ski)基因的表达,探讨C-SKI基因沉默后对心肌细胞细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用.方法 应用RT-PCR及蛋白质印迹方法 检测SW620,HT-29,Lo-Vo,H9C2及RKO细胞系中C-SKI的表达状况;设计人C-SK1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染C-SKI高表达的心肌细胞细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法 鉴定其对C-SKI基因的沉默效果;C-SKI基因沉默后通过MTT实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力.结果 C-SKI在H9C2中高表达,构建C-SKIshRNA慢病毒载体沉默H9C2细胞中C-SKI的表达,蛋白质免疫印迹结果 提示,C-SKI稳定沉默的H9C2细胞构建成功.在稳定沉默C-SKI基因后,MTT法显示C-SKI沉默不会影响细胞的增殖能力.细胞小室实验结果 显示,C-SKI沉默后H9C2侵袭和迁移能力均增强(P<0. 001).结论 C-SKI基因能够一定程度上抑制心肌细胞的迁移和侵袭,进而参与了心肌细胞纤维化的发生发展.
作者:凌佳;蔡振荣;庄晓华;阚丽虹;汪飞;叶小磊
来源:贵州医药 2018 年 42卷 1期