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目的:在人胶质瘤A172细胞系中干扰和过表达自分泌运动因子受体( autocrine motility factor re-ceptor, AMFR)后,研究AMFR对其侵袭力的影响。方法应用体外连接法将外源AMFR的DNA连接到带GFP的外源干扰( shRNA)和过表达( cDNA)腺病毒基因组HK293中,运用荧光定量PCR ( QPCR)法得出其扩增曲线检验二种病毒的滴度,然后运用RT-PCR和Western印迹法来检测二种病毒是否成功干扰和过表达,和只带GFP标签正常的A172( con A172)相比较,用MTT的方法来检测A172细胞增殖能力,应用伤口愈合实验( wound healing assay)检测A172的细胞迁移能力, Transwell实验来检测细胞侵袭能力,从而研究AMFR与胶质瘤细胞的迁移能力的相关性。结果成功干扰A172细胞系( shRNAA172)和过表达细胞系( cDNAA172)中的AMFR,和正常的A172细胞系比较, AMFR干扰的细胞增殖能力、迁移和侵袭能力降低,过表达的AMFR A172细胞增殖能力、迁移和侵袭能力增强。结论 AMFR的表达量与胶质瘤细胞迁移和侵袭能力呈正相关。

作者:陈强;蒋敏;李丹

来源:医学分子生物学杂志 2016 年 13卷 2期

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作者:
陈强;蒋敏;李丹
来源:
医学分子生物学杂志 2016 年 13卷 2期
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胶质瘤细胞 自分泌运动因子受体(AMFR) 肿瘤迁移与侵袭 gliomas cell autocrine motility factor receptor(AMFR) migration invasion
目的:在人胶质瘤A172细胞系中干扰和过表达自分泌运动因子受体( autocrine motility factor re-ceptor, AMFR)后,研究AMFR对其侵袭力的影响。方法应用体外连接法将外源AMFR的DNA连接到带GFP的外源干扰( shRNA)和过表达( cDNA)腺病毒基因组HK293中,运用荧光定量PCR ( QPCR)法得出其扩增曲线检验二种病毒的滴度,然后运用RT-PCR和Western印迹法来检测二种病毒是否成功干扰和过表达,和只带GFP标签正常的A172( con A172)相比较,用MTT的方法来检测A172细胞增殖能力,应用伤口愈合实验( wound healing assay)检测A172的细胞迁移能力, Transwell实验来检测细胞侵袭能力,从而研究AMFR与胶质瘤细胞的迁移能力的相关性。结果成功干扰A172细胞系( shRNAA172)和过表达细胞系( cDNAA172)中的AMFR,和正常的A172细胞系比较, AMFR干扰的细胞增殖能力、迁移和侵袭能力降低,过表达的AMFR A172细胞增殖能力、迁移和侵袭能力增强。结论 AMFR的表达量与胶质瘤细胞迁移和侵袭能力呈正相关。