目的：建立乙型肝炎病毒（HBV ）逆转录酶区PCR产物测序方法，检测 HBV耐药突变位点及基因型。方法采用了巢式PCR方法，分别在HBV基因组逆转录（RT ）区头尾设计内外两对引物，扩增全长RT 区1223 bp序列。并用该方法对已经完成测序的HBV B、C基因型，拉米夫定耐药株，恩替卡韦耐药株全长重组质粒扩增RT区来验证方法的保真度；用该方法从病毒载量1×103～1×108 copys/mL HBV血清中扩增RT区来验证方法的灵敏度；通过对4例临床标本的检测来验证方法的实用性。结果建立了乙型肝炎病毒逆转录酶区PCR产物测序方法；以已经完成测序的 HBV B、C基因型，拉米夫定耐药株，恩替卡韦耐药株全长重组质粒为模板扩增RT区序列，测序结果与已知序列确证无误，有很好保真度；能从病毒载量1×103～1×108 copys/mL HBV血清中扩增到目标序列，有很好的灵敏度；能从临床患者血清中扩增HBV RT区并测序，序列分析后能为临床提供HBV核苷（酸）类似物耐药位点突变及HBV基因型信息。结论建立了一种具有很好保真度、灵敏度以及实用性的 HBV逆转录酶区PCR产物测序方法。
作者：陆仁飞；吴月平；张宏萍；周敏
来源：国际检验医学杂志 2014 年 8期
